Los tricomas glandulares en Cannabis sativa

Los tricomas glandulares en Cannabis sativa

El THC se sintetiza en las glándulas de resina, unas células especializadas que segregan una mezcla de resinas, aceites esenciales y cannabinoides (THC, CBD, CBDA, CBN, etc.). Estas glándulas de resina que recubren a modo de pelos la superficie de las flores (cogollos) y hojas pequeñas, se llaman tricomas glandulares.

Durante las últimas semanas de vida, el Cannabis sativa empieza a segregar THC. Cuando los tricomas están llenos la planta deja de segregar más THC y éste va desapareciendo lentamente, degradándose en CBN. Una planta con más concentración de THC y menos de CBN y CBD será más psicoactiva, en cambio una planta con mayor concentración de CBN y CBD será más narcótica, más calmante.

Las rutas biosintéticas de los cannabinoides en la planta se han logrado establecer muy recientemente. Dichas rutas comienzan desde terpenos precursores como el isopreno y el ácido mevalónico, seguida por la combinación del ácido olivetólico y el geranil pirofosfato. La unión de estos dos compuestos forman la molécula cannabinoide precursora básica, el ácido cannabigerólico (CBGA), que se convierte a ácido cannabigerólico monometil éter (CBGAM) y al ácido hidroxicannabigerólico (hidroxi-CBGA). Durante la transición de estos compuestos, se generan los ácidos cannabicroménico (CBCA) y los ácidos cannabidiólico (CBDA) y tetrahidrocannabinólico (THCA).

Hasta hace muy poco tiempo se pensaba, de forma errónea, que el ácido cannabidiólico (CBDA), se ciclaba a ácido tetrahidrocannabinólico (THCA), significando que si no había transformación o bien ésta era escasa, del ácido cannabidiólico (CBDA) al ácido d-9-tetrahidrodannabinólico (THCA), habría poco o ningún THC en las plantas y mucho CBD. Recordemos que el THC se forma por la eliminación (descarboxilación) del grupo ácido (COOH) del THCA. En 1997, el Profesor de farmacobotánica, Yukihiro Shoyama de la Universidad Kyushu de Japón, estableció al fin, científica y claramente la ruta biosintética de los cannabinoides, al lograr aislar las enzimas sintasas del THCA, CBDA y CBCA. Este descubrimiento reveló que “los caminos biosintéticos del cannabinoide precursor CBGA (Acido Cannabigerólico) a CBDA, THCA y CBCA, existen cada uno independientemente”. Este hallazgo tira por tierra las consideraciones de investigaciones anteriores en las que se afirmaba que era necesaria para la biosíntesis del THC, la formación del cannabinoide CBDA para luego ciclarse a THCA. De ahí la importancia de la capacidad biosintética de cada planta para poder sintetizar la enzima específica para desarrollar el THCA. Si una variedad no tiene la capacidad genética de fabricar cantidades importantes de “sintasa THCA”, no tendrá un potencial adecuado como semental productor de THC».

Rutas biosinteticas THC

El descubrimiento de las nuevas rutas biosintéticas del CBD y THC, enmarcan un nuevo panorama para el estudio de la producción de cannabinoides endógenos en las plantas. Cuando la actividad de esta enzima se encuentra impedida, los niveles de THC decrecen y favorece el de otros cannabinoides y productos de segundo orden.

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Las características microscópicas para la identificación positiva de Cannabis sativa

Cannabis sativa puede ser identificada por unas estructuras microscópicas que se desarrollan en la superficie de la planta llamadas tricomas. Los tricomas o pelos vegetales son apéndices de la epidermis de las plantas. Las funciones que desempeñan son variadas: absorción de agua, regulación de la temperatura, dispersión de semillas y frutos, protección contra agentes abrasivos y percepción de estímulos. Los tricomas glandulares además, eliminan compuestos pegajosos que atrapan a los insectos o sustancias tóxicas que los irritan, matan o modifican su comportamiento.

Hay dos tipos principales de tricomas y se pueden observar con un microscopio binocular:

A) Tricomas no glandulares: son numerosos, unicelulares, pelos rígidos y curvos, con ápice agudo delgado, de base abultada:

  • Tricomas de Cannabis sativa cistolísticos; situados en la superficie superior de la hojas de Cannabis sativa tienen forma de garra y puede tener cristales (cistolitos) de carbonato de calcio visibles en sus bases. Con frecuencia, los tricomas se rompen liberando el cálculo vesical.
  • Tricomas de Cannabis sativa no cistolísticos, se producen principalmente en la parte inferior de las hojas, brácteas y bracteolas y carecen de la base ampliada.
  • La presencia simultánea Tricomas cistolísticos en la superficie superior y de Tricomas no cistolísticos en la parte inferior superficie de las hojas es una característica de Cannabis sativa.

B)  Tricomas glandulares: Se producen como:

  • Glándulas sésiles, es decir, tricomas sin tallo, que se encuentran generalmente en la epidermis inferior;
  • Tricomas glandulares con tallos pluricelulares. Tallos largos pluricelulares situados en las bracteolas que rodean las flores femeninas.

Los tricomas glandulares son las estructuras donde se produce y almacena la resina de Cannabis sativa. Estos están principalmente asociados con las estructuras de las flores, pero también se puede encontrar en la parte inferior de las hojas y, ocasionalmente, en los tallos de las plantas jóvenes.

Algunas plantas presentan tricomas que se pueden confundir con los presentes sobre el Cannabis sativa  sativa y se debe tener cuidado en la identificación definitiva. Sin embargo, la combinación de pelos cistolísticos en la superficie superior de las hojas y de tricomas y glándulas sésiles  en la superficie inferior, que es exclusivo de Cannabis sativa, lo cual permite la identificación positiva de material, incluso fragmentado.

Cabe señalar, sin embargo, que las plántulas muy inmaduras y en tallos sin hojas adjuntas no podría ser definitivamente identificadas como Cannabis sativa.

Para más detalles sobre la identificación de Cannabis sativa y de técnicas de microscopía más sofisticadas, se puede consultar la siguiente bibliografía.

Jackson, B.P. and Snowdon, D.W. (1968), Powdered Vegetable Drugs, J&A Churchill Ltd., London
Dayanandan, P. and Kaufman, P.B. (1976), Trichomes of Cannabis sativa L. (Cannabaceae), Amer. J. Bot. 63(5), 578-591
Hammond, C.T. and Mahlberg, P.G. (1973), Morphology of glandular hairs of Cannabis sativa from scanning electron microscopy, Amer J. Bot., 60(6) 524-528
Segelman, A.B. et al. (1973), J. Pharm. Sci., Vol 62, Issue 3, 515-516
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Las caracteristicas macroscopicas de Cannabis sativa

Las caracteristicas macroscopicas de Cannabis sativa

Las características morfológicas y el color de plantas de Cannabis sativa se ven influidas por la variedad, así como por factores ambientales tales como la luz, el agua, los nutrientes y el espacio.

Como planta dioica, las flores de las plantas individuales son unisexuales, tiene flores masculinas y flores femeninas, también suele haber plantas masculinas y femeninas, aunque también se dan casos con plantas que tiene flores de ambos sexos, por otro lado a menudo, las flores femeninas son de transición y las flores del sexo opuesto se desarrollan más tarde.

Las plantas masculinas suelen ser más altas pero menos robustas que las plantas hembra.

Tallo de Cannabis sativa

Los tallos son de color verde, erectos, huecos y con ranuras longitudinales. Pueden variar desde 0,2 hasta 6 m., aunque la mayoría de las plantas alcanzan alturas de 1-3 m.

El grado de ramificación, como altura de la planta, depende del medio ambiente y de la herencia genética, así como del método de cultivo.

Las ramas laterales varían de opuestas a alternadas en cualquier parte del tallo principal.

La disposición de las hojas cambia según la posición en la planta en la que se encuentran. Los pecíolos, sección que unen las hojas a las ramas son de 2 a 7 cm de largo con una estrecha ranura a lo largo de la parte superior.

Hojas de Cannabis sativa

La hoja es palmeada y se compone de 3-9 folíolos lanceolados de 3-15cm. x 0,2-1,7 cm. Los los márgenes son dentados, los dientes apuntando hacia las puntas, las nervaduras van desde la parte central hasta las puntas de los dientes. La parte inferior de la hoja, el envés, es una superficie de color verde pálido con glándulas resinosas dispersas, de color blanco a marrón amarillento.

Cada flor estaminada (masculinas) se compone de cinco sépalos (cubierta exterior peluda) de color blanco-verde de aproximadamente 2,5-4 mm de largo, con cinco estambres de los cuales cuelgan de filamentos delgados las anteras.

Las flores femeninas (pistiladas) están muy unidas a la planta y se propagan en pares, la flor tiene una bráctea verde pequeña que encierra el ovario con dos estigmas largos y delgados con una proyección muy por encima de las brácteas.

Fruto de Cannabis sativa

El fruto es un aquenio que contiene una sola semilla con una cáscara muy dura bien cubierta por la delgada pared del ovario.

Es elipsoide, levemente comprimida, suave, y de alrededor de 2-5 mm de largo, generalmente parda y moteada. El fruto es comúnmente considerado como una semilla.

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El examen fisico de Cannabis sativa

El examen fisico de Cannabis sativa

Los métodos utilizados para identificar el Cannabis sativa dependen de la naturaleza de lo que estemos examinando, podrán ser identificados sobre la base de las características morfológicas, siempre y cuando estas se hayan manifestado. Se realizará pues un examen macroscópico y otro microscópico.

Cuando no hay características morfológicas, como en el caso de la resina y el hachís, la identificación se basa en el análisis químico, lo que demostrará la presencia de Cannabinoides, como el tetrahidrocannabinol (THC), el cannabinol (CBN) y / o cannabidiol (CBD).

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Identificacion positiva de Cannabis sativa

Identificacion positiva de Cannabis sativa

La elección de la metodología y el enfoque del análisis así como la decisión o no de métodos adicionales a realizar son aspectos que se deberían discutir con el analista o bien este debería razonar en su informe el porqué de su elección, también dependerá claro de la disponibilidad de instrumentos adecuados y de que estos tengan el nivel de la prueba legalmente aceptable en la jurisdicción en la que el analista trabaja.

En el caso de Cannabis sativa que presenta características botánicas propias, una combinación de  prueba de color, cromatografía en capa fina y examen físico (macroscópico y microscópico) se considera aceptable como examen analítico mínimo para su identificación positiva.

Las normas generales para la selección del método mas apropiado fueron formuladas por el Grupo de Trabajo Científico sobre Drogas (SWGDRUG)

[http://www.swgdrug.org/approved.htm].
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Método comunitario para la determinación cuantitativa del Δ 9 –THC.

Objeto y campo de aplicación

El método sirve para determinar el contenido de Δ 9 -tetrahidrocanabinol (THC) de las variedades de cáñamo (Cannabis sativa L.). Según el caso, se aplicará de acuerdo con el procedimiento A o con el procedimiento B que se describen a continuación.

El método se basa en la determinación cuantitativa por cromatografía en fase gaseosa (CFG) del Δ 9 -THC previa extracción mediante un disolvente.

Procedimiento A

El procedimiento A se utilizará para las comprobaciones en la fase de producción previstas en el apartado 2 del artículo 5 bis del Reglamento (CE) no 1251/1999.

Procedimiento B

El procedimiento B se utilizará para los casos indicados en el párrafo tercero del apartado 1 del artículo 7 del presente Reglamento y para comprobar la observancia de los requisitos establecidos en el párrafo segundo del apartado 1 del artículo 5 bis del Reglamento (CE) no 1251/1999 con miras a la inscripción en la lista de variedades de cáñamo destinado a la producción de fibras con derecho al pago por superficie a partir de la campaña 2001/02.

Muestreo

Toma de muestras

  • — Procedimiento A: en una población de una variedad de cáñamo dada, se tomará en cada planta seleccionada una parte de 30 cm que contenga como mínimo una inflorescencia femenina. Las muestras se tomarán durante el período comprendido entre los veinte días siguientes al comienzo de la floración y los diez siguientes al final de la misma, durante el día, según un recorrido sistemático que permita una toma de muestras representativa de la parcela y excluyendo las orillas. El Estado miembro podrá autorizar la toma de la muestra durante el período comprendido entre el comienzo de la floración y los veinte días siguientes a ésta, siempre que procure que, por cada variedad cultivada, se efectúen otras tomas de muestras representativas según las normas anteriormente descritas, durante el período comprendido entre los veinte días siguientes al comienzo de la floración y los diez días siguientes al final de la misma.
  • — Procedimiento B: en una población de una variedad de cáñamo dada, se tomará el tercio superior de cada planta seleccionada. Las muestras se tomarán durante los diez días siguientes al final de la floración, durante el día, según un recorrido sistemático que permita una toma de muestras representativa de la parcela y excluyendo las orillas. En las variedades dioicas, sólo se tomarán muestras de plantas femeninas.

Tamaño de la muestra

  • — Procedimiento A: la muestra de cada parcela estará compuesta por las muestras de 50 plantas.
  • — Procedimiento B: la muestra de cada parcela estará compuesta por las muestras de 200 plantas.

Cada muestra se colocará en un saco de tela o papel, sin comprimirla, y se enviará al laboratorio de análisis.

El Estado miembro puede determinar que se recoja una segunda muestra, para un posible contranálisis, y que la conserve el productor o el organismo encargado del análisis.

Secado y almacenamiento de la muestra

Las muestras deberán comenzar a secarse lo antes posible y, en cualquier caso, en un plazo máximo de 48 horas, mediante un método en el que la temperatura sea inferior a 70 °C. Se secarán hasta alcanzar un peso constante y una humedad situada entre el 8 y el 13%.

Las muestras secas se conservarán, sin comprimir, en un lugar oscuro y a una temperatura inferior a 25 °C.

Análisis del contenido de THC

Preparación de la muestra de laboratorio

Los tallos y las semillas de más de 2 mm se eliminarán de las muestras secas.

Las muestras secas se triturarán hasta obtener un polvo semifino (tamiz de 1 mm de malla).

Conservación máxima del polvo durante diez semanas, en un lugar seco, oscuro y a una temperatura inferior a 25 °C

Reactivos, solución de extracción

Reactivos:

  • — Δ 9 -tetrahidrocanabinol cromatográficamente puro
  • — Escualano cromatográficamente puro como patrón interno

Solución de extracción

  • — 35 mg. de escualano por 100 ml. de hexano.

Extracción del Δ 9 -THC

Pesar 100 mg. de muestra de laboratorio en polvo y colocarlos en un tubo de centrifugadora; añadir 5 ml. de solución de extracción que contenga el testigo interno.

Sumergir todo ello durante veinte minutos en un baño de ultrasonidos. Centrifugar durante cinco minutos a 3 000 revoluciones/minuto y extraer la solución de THC que flota. Inyectar este último en el aparato de cromatografía y efectuar el análisis cuantitativo.

Cromatografía en fase gaseosa

a) Equipo

  • — Cromatógrafo en fase gaseosa provisto de un detector de ionización por llama e inyector con y sin fraccionamiento (split/splitless).
  • — Columna que permita una buena separación de los canabinoides, por ejemplo una columna capilar de cristal de 25 m de largo y 0,22 mm de diámetro impregnada de una fase apolar de tipo 5 % fenil-metil-siloxano.

b) Escalas de contraste

Como mínimo 3 puntos en el caso del procedimiento A y 5 en el del procedimiento B, con los puntos 0,04 y 0,50 mg. de Δ 9 -THC por ml. de solución de extracción.

c) Condiciones del equipo

Las condiciones siguientes son sólo un ejemplo y corresponden a la columna citada en la letra a):

  • — Temperatura del horno: 260 °C
  • — Temperatura del inyector; 300 °C
  • — Temperatura del detector: 300 °C

d) Volumen de inyección: 1 μl

Resultados.

El resultado se expresará con dos decimales, en gramos de Δ 9 -THC por 100 gramos de muestra de laboratorio, secada hasta un peso constante. Se aplicará al resultado una tolerancia de 0,03 % en valor absoluto.

— Procedimiento A: el resultado corresponderá a una determinación por muestra de laboratorio.

No obstante, en caso de que el resultado obtenido sea superior al límite previsto en el párrafo segundo del apartado 1 del artículo 5 bis del Reglamento (CE) no 1251/1999, se efectuará una segunda determinación por muestra de laboratorio y el resultado corresponderá a la media de ambas determinaciones.

— Procedimiento B: el resultado corresponderá a la media de dos determinaciones por muestra de laboratorio.»

Estas se han adaptado para tener en cuenta los aspectos prácticos y la variedad de productos de Cannabis sativa en el mercado ilícito. La importancia de la cantidad y composición en los delitos relativos a drogas tóxicas, estupefacientes y sustancias psicotrópica

Dentro de los delitos contra la seguridad colectiva del Titulo XVIII del Código Penal (LO 10/1995 de 23 de noviembre) se regulan en el Capitulo III los delitos contra la salud pública. Estas figuras delictivas tiene en común el objetivo de proteger la salud pública de los efectos nocivos de ciertas sustancias dañinas englobadas bajo los conceptos de drogas tóxicas, estupefacientes y sustancias psicotrópicas. Todas estas sustancias pueden producir graves alteraciones en el organismo que pueden ir desde una simple adicción hasta provocar la muerte o enfermedades graves que comprometan la salud de los consumidores. A pesar de su potencialidad es evidente que no todas las cantidades producen los mismos efectos, sino que una cantidad menor será menos perjudicial que una dosis mayor, y es por ello que la jurisprudencia tiene en cuenta la cantidad objeto de delito para imponer una mayor o menor pena, a pesar de que estén encuadradas dentro de las mismas conductas.

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Calculo del grado de humedad de Cannabis sativa

Calculo del grado de humedad de Cannabis sativa

Un modo de hacer el calculo de humedad en Calculo del grado de humedad de Cannabis sativa es con un detector de humedad para biomasa BM1 / BM2, este aparato sirve para determinar la humedad absoluta de biomasa con memoria de valores interna, modelo BM2 incluye interfaz RS-232 y software

El detector de humedad BM1/BM2 determina la humedad en la biomasa de manera rápida y precisa. El detector de humedad para biomasa no requiere preparación para las pruebas y proporciona valores de medición de humedad de la biomasa correspondiente en cuestión de segundos. Una característica importante del aparato es su memoria de valores interna (10.000 valores). Presionando una tecla se guarda en la memoria el valor de medición actual (con núm. de carga, fecha y hora). Esto posibilita su uso en el control de entrada y salida, la documentación de los envíos y un control sencillo en caso de reclamaciones o el cálculo por peso de la biomasa entregada. El modelo BM2 incluye un software y un cable de datos RS-232 que le permitirá realizar la transmisión y la valoración de los datos en el PC. Es necesaria una balanza para el funcionamiento del detector de humedad (rango de medición de 0 … 10 kg) que no se incluye en el aparato.

Por medio de las siguiente formulas podremos sacar el % de materia seca o de humedad

W – %

H – %

Materia seca

Humedad

( Ww/Ws )*100

((Ww-Ws)/Ws)x100

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Muestreo de la hierba de Cannabis Sativa

Muestreo de la hierba de Cannabis Sativa

En el mercado ilegal, se encuentran una gran variedad de productos de Cannabis sativa distintos, desde material vegetal suelto, hasta «flores secas», «sobres de marihuana», o “te de marihuana».

Como se describe en la sección anterior, treinta piezas que se consideren pertenecientes al mismo fenotipo se toman como una muestra.

Si hay menos material, se coge todo. Las partes leñosas se desechan. Las semillas de las flores se guardarán.

Las muestras húmedas tienen que ser empaquetadas en bolsas de papel. Las muestras secas se pueden guardar en bolsas de plástico

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El muestreo en las incautaciones de productos de Cannabis sativa

Para los aspectos generales de muestreo cualitativo de muestras de unidades múltiples, consultar:

 [Drugs Working Group of the European Network of Forensic Science Institutes (ENFSI) and UNODC (2009), Guidelines for representative drug sampling:
(www.unodc.org/unodc/en/scientists/guidelines-on-representative-drug-sampling.html.).]

Para material con características externas evidentes, es decir, material reconocible como Cannabis sativa, un método de muestreo basado en el modelo de Bayes puede ser preferible al enfoque hipergeométrico.

 

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Tecnicas de muestreo en plantas de Cannabis sativa

Tecnicas de muestreo en plantas de Cannabis sativa

Para un campo de Cannabis sativa «visualmente se debe ver que todo el Cannabis sativa es de la misma especie o fenotipo», recoger al menos 30 inflorescencias o frutos, cada uno de una planta distinta, cogidos al azar, nunca de los bordes del campo, cortar un trozo de unos 20 cm. y guardarlos en una bolsa de papel.

Para propósitos identificativos (análisis cualitativo), el muestreo de una planta representativa se considera suficiente.

[Drugs Working Group of the European Network of Forensic Science Institutes
(ENFSI) and UNODC (2009), Guidelines for representative drug sampling .]
http://www.unodc.org/documents/scientific/Drug_Sampling.pdf

Siempre que sea posible, la muestra debe ser secada antes de enviarla al laboratorio, si tiene que ser almacenada por cualquier razón antes de ser analizadas, debe ser en un lugar oscuro y fresco.

Una vez seca, la degradación de los cannabinoides principal se detiene. Sin embargo, en esta etapa de THC es todavía sensible al aire (oxígeno) y a la luz UV, la cual oxida el THC a CBN. Por lo tanto, las condiciones de almacenamiento idóneas son en algún lugar oscuro y fresco.

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